磁珠法质粒DNA小量提取试剂盒(1～2mL)

产品货号：

GS0113

中文名称：

磁珠法质粒DNA小量提取试剂盒(1～2mL)

英文名称：

MagBead Plasmid DNA Mini-Preps Kit(1-2mL)

产品规格：

50次|100次

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒将磁性纳米分离技术和细菌细胞的SDS碱裂解法结合从菌体中提取高质量的质粒DNA。在离心力的作用下细胞碎片和SDS复合物沉淀下来。在一定的条件下磁珠能很好的吸附存在于上清中的质粒DNA，其他杂质如蛋白质、盐离子等通过洗涤被除去。当条件改变时，磁珠释放吸附的质粒DNA。对于高拷贝质粒，从2mL过夜培养的菌液（OD₆₀₀=2.0）中可以获得超过15μg的质粒DNA。

本试剂盒提取得到的质粒纯度高，OD₂₆₀/OD₂₈₀比值一般为1.8～1.9之间，OD₂₆₀/OD₂₃₀比值大于2.0，可直接用于转化、DNA测序、PCR和酶切等后续实验。

与同类产品相比，提取效率更高，获得质粒的纯度更高；
与柱式法相比，可大大减少离心次数，获得完整性更好的质粒。

组分	50T	100T
Buffer MP1	14mL	28mL
Buffer MP2	14mL	28mL
Buffer MP3	14mL	28mL
MagPure Beads	1.25mL	2.5mL
Buffer MPB	30mL	60mL
TE Buffer（pH8.0）	10mL	20mL
RNase A（10mg/mL）	210μL	420μL

试剂盒中的MagPure Beads和加入RNase A的Buffer MP1请存放于2～8℃，其他试剂室温保存。
Buffer MP2和Buffer MP3中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

自备材料：磁力架、水浴锅、小型高速离心机（最大离心力≥ 12000×g）、1.5mL离心管、70%乙醇。
试剂盒初次开启，将RNase A全部加入Buffer MP1中，充分混匀后在瓶身做好标记。储存于2～8℃，有效期6个月。
每次使用前请检查Buffer MP2是否出现沉淀，如有沉淀，请于37℃溶解沉淀，待冷却至室温后使用。

在含合适抗生素的培养基中接种目标菌株，于37℃摇床充分振荡培养12～16小时。
- 菌液状态对质粒DNA得率非常关键，请用不超过容器容量1/4体积的培养基进行培养。
- 处于生长平台期的菌体用于质粒抽提得率最高，过度培养可能导致DNA降解。
对于高拷贝质粒，取1～2mL菌液，室温10000rpm离心2min收集菌体，吸净上清。
- 对于高拷贝质粒，从2mL过夜培养菌液中通常可以获得超过15μg质粒DNA，不推荐使用更大的菌液量。
- 对于低拷贝质粒，如果使用更多的菌液，则同一个样品分多管收集，每管不超过5mL，分别裂解，然后用同一批MagPure Beads吸附质粒DNA获得更高的得率。
向菌体沉淀中加入200μL Buffer MP1，吸打或振荡至彻底悬浮菌体。
- Buffer MP1首次使用时请检查是否已加入RNase A。
- 请彻底悬浮菌体，否则影响得率和质量。
加入250μL Buffer MP2，立即温和颠倒离心管5～10次混匀，室温静置3～5min至完全裂解。
- 裂解时间与菌量相关，菌量多则适当延长时间，最长不能超过5min。
- 如果同时操作多个样品，每加入一管混匀一管，不要采用全部加入一起混匀的方法，计时从第一管样品加入开始。
- 混匀时，动作要温和，如果剧烈震荡，可能把基因组DNA打断混杂在质粒中。
加入200μL Buffer MP3，立即温和颠倒离心管5～10次充分混匀。
- 如果同时操作多个样品，每加入一管混匀一管，不要采用全部加入一起混匀的方法。
- 如果起始菌液较多，混匀后室温静置5min以彻底去除RNA。
于离心机最大转速（≥ 12000rpm）离心5～10min，小心吸取600μL上清并转移至新的1.5mL离心管中，然后向上清液中加入与上清等体积的Buffer MPB和25μL MagPure Beads，温和吸打混匀，室温静置1min。
- 加MagPure Beads之前，请将其充分混匀。
- 请务必将MagPure Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留MagPure Beads吸打干净。
- 处理多个样品时，可先将Buffer MPB与MagPure Beads按24:1的体积比混匀，然后向每个离心管当中加入625μL上述混合液。
将离心管置于磁力架上5min，待MagPure Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，然后从磁力架上取出离心管。
- 吸弃上清前，若管口粘有少量MagPure Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagPure Beads吸附至管壁上。
- 当所有MagPure Beads完全吸至管壁上时，上清液应是无色澄清，若5min后上清液是淡黄色，请适当延长吸附时间，直到上清液无色澄清。
- 吸弃上清时，请勿吸入MagPure Beads，尽量吸净上清。
- 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
向离心管中加入900μL 70%乙醇，缓慢吸打混匀，将离心管置于磁力架上1min，待MagPure Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
- 吸弃上清前，若管口粘有少量MagPure Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有MagPure Beads吸附至管壁上。
- 吸上清时，请勿吸入MagPure Beads，尽量吸净上清。
重复步骤8一次，室温开盖干燥15～20min或者55℃恒温箱中开盖干燥5～7min至管内无液体残留。
- 干燥前，请尽量将管内液体吸干。
- 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有MagPure Beads完全吸至管壁之后再吸净管内液体。
加入50～100μL的TE Buffer（pH8.0），65℃水浴5～10min，间或混匀。
- 请将管壁上所有MagPure Beads悬浮在TE Buffer中。
- 根据实验需要可以将TE Buffer（pH8.0）用无菌的双蒸水（pH＞7.5）代替。
取出离心管并置于磁力架上1min，待MagPure Beads完全吸至管壁上之后，吸取上清至新的离心管，即获得纯的质粒DNA。
- 吸取上清前，请确保所有MagPure Beads完全吸至管壁，请勿吸入MagPure Beads，否则影响产物纯度。

未提取出质粒或质粒得率较低
- 菌株老化。请涂布平板培养后，重新挑选单菌落进行液体培养。
- 质粒拷贝数低。由于使用低拷贝数载体引起的质粒DNA提取量低，可以使用更多的菌量但需要相应增加溶液使用量。
- 菌体中无质粒。有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。例如，柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定，因此不要频繁转接，每次接种时应接种单菌落。另外，检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。
- 碱裂解不充分。使用过多菌体培养液，会导致菌体裂解不充分，可减少菌体用量或增加Buffer MP1，MP2和MP3的用量。
- 溶液使用不当。Buffer MP2和MP3在温度较低时可能出现沉淀，应置于37℃温浴直至沉淀溶解，待冷却至室温后使用。
- 洗脱液不合适。洗脱效率与洗脱液的pH值有关，如果使用水进行洗脱，请确保其pH> 7.5，如果pH过低可能导致洗脱量低，可以用1mol/L氢氧化钠溶液调节水的pH值。
- 溶液失效。Buffer MP2长期暴露在空气中容易失效，请每次使用完后，立即盖紧瓶塞，以免失效，造成碱裂解不充分。
- 结合不充分。加入Buffer MPB和MagPure Beads之后，请将其充分混匀，并使MagPure Beads处于悬浮状态。
- 操作过程中丢失MagPure Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的MagPure Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的MagPure Beads也吸附在管壁上。
- 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有MagPure Beads充分悬浮在TE Buffer中。
- 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5～10min，常温条件下MagPure Beads只能释放少量的质粒DNA，65℃条件下MagPure Beads与DNA的相互作用力减弱，MagPure Beads释放出大量的质粒DNA。
质粒纯度不高
- 混有蛋白。请勿使用过多菌体。经Buffer MP1，MP2和MP3处理，离心后溶液应为澄清，如果还混有微小蛋白悬浮物可再次离心，并延长离心时间，完全沉淀蛋白后再取上清。
- 混有RNA。RNase A处理不彻底，请减少菌体用量或加入Buffer MP3后室温再延长放置时间5～10min。如果Buffer MP1已保存6个月以上，请在Buffer MP1中再添加终浓度为100μg/mL的RNase A。
- 混有基因组DNA。加入Buffer MP2后应温和混匀，如果剧烈振荡，可能把基因组DNA打断从而混杂在质粒中。如果加入Buffer MP2后过于粘稠，无法温和混匀，请减少菌体用量。细菌培养时间过长会导致细胞内DNA的降解，培养时间不要超过16h。
- 质粒的二聚体和多聚体形式。质粒复制过程中形成的，与宿主菌相关，电泳可检测出多条条带，单酶切处理后可变成单一条带。
- 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁力架上取出离心管，放置2min之后再将离心管置于磁力架上30 s，吸净管底的液体。若出现残液的挂壁现象，请短暂离心之后再将离心管置于磁力架上30 s，吸净离心管内的液体。
- MagPure Beads洗涤不充分。向离心管中加入70%乙醇以后，请充分混匀，使MagPure Beads充分悬浮在70%乙醇中。
- MagPure Beads没有完全干燥。请将MagPure Beads完全干燥，保证无乙醇残留。
- 最后一步吸取上清时吸入MagPure Beads。请确保所有MagPure Beads吸至管壁上，再吸取上清。如果不小心吸入MagPure Beads，请将上清液放回原管，待MagPure Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的上清DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。

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